Для чего проводят бактериоскопию мазков отпечатков
Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка ( по Граму)
Где проводится: Во всех медицинских центрах и лабораториях «Тонус»
Срок выполнения: 1-2 рабочих дня
Бактериоскопия (Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму) – это метод, в основе которого лежит исследование бактерий под микроскопом. Это быстрый метод диагностики, который широко используется врачами разных специальностей при подозрении на наличие бактериального инфекционного процесса.
Важно понимать, что бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму является не совсем специфичным методом, и для полноценной идентификации возбудителя, а также, определения его чувствительности к антибиотикам, необходимо проведение бактериального посева.
Бактериоскопия широко используется как в терапии, так и в акушерско-гинекологической практике.
В зависимости от типа, бактерии можно разделить на Грам положительные и Грам отрицательные. Есть ряд бактерий, которые не имеют специфической окраски по Граму. В зависимости от расположения в организме (заселения тех или иных слизистых оболочек и органов), спектр бактерий меняется.
Например, при исследовании гинекологических мазков, нормальной флорой являются грамположительные палочки (лактоморфотипы). При возникновении инфекционного процесса, данный тип бактерий, как правило, угнетается и активизируетс рост условно-патогенной и патогенной микрофлоры. При бактериальном вагинозе, как правило, имеет место коккобацилярная грамвариабельная микрофлоры. При гонорее в мазке будут присутствовать грамотрицательные кокки бобовидной формы, расположенные парами (по типу «кофейных зерен»). При других гнойных заболеваниях (не отличающихся специфичностью клиники и возбудителя), при микроскопии, в зависимости от этиологии, встречаются как грамположитеьные, так и грамотрицательные палочки. Помимо выявления возбудителя, в мазке учитывается наличие клеток эпителия, количество лейкоцитов, присутствие ключевых клеток.
Если в качестве исследуемого материала используется мокрота, то обычно, в ней находят грамположитеьные кокки, морфологически сходные с пневмококками, либо мелкие неодинаковой формы палочки, грамотрицательные кокки.
В мазке из раны чаще всего встречаются грамположительные кокки.
Таким образом, материалом для бактериоскопического исследования могут быть:
Так как бактериоскопическое исследование не позволяет с высокой точностью определить возбудителя, после него необходимо проведение бактериологического посева содержимого на флору.
Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму позволяет врачу быстро сориентироваться в большом количестве возможных возбудителей и выбрать антибактериальный препарат для стартовой терапии, обладающий таким спектром, чтобы воздействовать на определнную группу бактерий, так как посев на флору требует нескольких дней для получения результата, а начать лечение необходимо непосредственно по факту обращения пациента за помощью.
Условия подготовки к проведению бактериоскопического исследования окрашенного мазка по Граму определяется лечащим врачом и обусловлено тем, в какой области будет производиться забор биологического материала.
Важно проводить исследование до начала антибактериальной терапии.
Показанием к проведению бактериоскопического исследования окрашенного мазка по Граму является наличие инфекционно-воспалительного процесса различной локализации (мочеполовой системы, легких и дыхательных путей, ЛОР-органов, глаз, слизистых оболочек любой локализации, раневых поверхностей и т.д.).
Основной целью данного исследования является выявление бактерий.
По результатам исследования выдается заключение, в котором отражено: наличие или отсутствие бактерий, тип бактерий (грамположительные, грамотрицательные и т.д.), оценка лейкоцитарной реакции (количество лейкоцитов), количественная оценка микрофлоры, другие возможные клеточные изменения.
Полезно знать
Бактериоскопия, или общий мазок на вагинальную флору
Когда специалисту необходимо выявить характеристики микрофлоры внутри влагалища, шейки матки и мочеиспускательного канала женщины, проводится забор материала для бактериоскопии. Еще это микроскопическое исследование называют «общий мазок из влагалища».
Как проводится исследование, и что показывают его результаты?
Материал забора распределяется на специальном стекле и при помощи красителя производится окраска препарата, с целью более четкого проявления бактерий под микроскопом. Оценка проводится по следующим показателям:
В дальнейшем, на основании полученных результатов врач назначает лечение подходящими препаратами.
В каких случаях назначается забор мазка на флору
Общий мазок из влагалища женщины берется при обращении в связи со следующими запросами:
Проведение исследований позволяет выявить причину недомогания или определить актуальное состояние мочеполовой женской системы и определить необходимость назначения препаратов.
Требования к проведению анализа с помощью мазка из влагалища
Рекомендуется сдавать мазок на 4-5 день менструального цикла, то есть в конце или сразу после месячных. Чтобы результаты исследования были достоверными, перед посещением специалиста придерживайтесь следующих правил «48 часов»:
Постарайтесь также в течение 2-3 часов перед процедурой забора не мочиться.
Что представляет процедура забора материала на флору?
Все происходит быстро и абсолютно не больно. Врач при помощи специального одноразового стерильного шпателя берет материал из трех областей: шейки матки, влагалища и уретры.
Как скоро будет готов результат?
Лаборатория проводит процедуру исследования и выдает результат в течение 1 рабочего дня.
Интерпретация результатов анализа общего мазка из влагалища
Присутствие в препарате мазка одинарных лейкоцитов и палочковая флора не является указанием на патологию. Это норма.
В случае воспалительного процесса в пр
епарате будут выявлены:
На кандидоз, или «молочницу» будет указывать присутствие нитей мицелия грибка. Такие возбудители как гонококки и трихомонады укажут соответственно на гонорею и трихомониаз.
С какими целями проводят посев на флору влагалища?
Данный вид анализа позволяет определить общее количество бактерий, распознать их принадлежность к тому или иному виду возбудителей и выяснить степень чувствительности микрофлоры к различным препаратам антибактериальной группы.
Бактериологические методы
В соответствии с современными программами ВОЗ, основой выявления туберкулёза за рубежом считают проведение микроскопии мазков мокроты, полученной от кашляющих больных, обратившихся к врачам общей практики; мазки окрашивают по Цилю-Нильсену. Эта методика входит в отечественный поликлинический и клинический минимум обследования пациента, выделяющего мокроту. В 1995 г. Минздравмедпром России в приказе № 8 «О развитии и совершенствовании деятельности лабораторной клинической микробиологии (бактериологии) лечебно-профилактических учреждений» подтвердил эту обязанность клинико-диагностических лабораторий. Обязательное бактериологическое исследование мокроты на М. tuberculosis должно быть организовано для нетранспортабельных больных, больных хроническими заболеваниями органов дыхания и мочевыводящей системы, а также для работников неблагополучных по туберкулёзу животноводческих хозяйств. Этот старейший метод полностью сохраняет свое значение вследствие доступности для практических клинико-диагностических лабораторий, низкой стоимости и быстроты выполнения.
Микобактерии туберкулёза имеют вид тонких, слегка изогнутых палочек различной длины с утолщениями на концах или посередине, располагаются группами и поодиночке (рисунок 1,а) Окрашенные по Цилю-Нильсену мазки микроскопируют с иммерсионной системой не менее 10 мин.
Люминесцентная микроскопия
Метод основан на проникновении в микробную клетку карболового производного флюоресцентного красителя (аурамина, родамина). При окраске флюоресцентным красителем аурамином-родамином микобактерии можно видеть при неиммерсионном 100-кратном увеличении. Более точен результат при окраске по Цилю-Нильсену карболфуксином и иммерсионной микроскопии при 1000-кратном увеличении. Именно окраска мазка по Цилю-Нильсену рекомендована при применении технологий DOTS. Микобактерии в этом случае выглядят светящимися желтыми палочками (рисунок 1, б). Метод имеет неоспоримые преимущества, так как позволяет при меньшем увеличении микроскопа просмотреть фактически весь мазок, так же этот метод экономически более эффективен, так как уменьшается время, затрачиваемое на просмотр мазков.
К недостаткам метода ЛМ следует отнести значительно более высокую стоимость люминесцентного микроскопа, при процедуре окрашивания- соблюдение и коррекция pH мазка, а также освобождение микобактерий в диагностическом материале (особенно в мокроте) от окружающей их слизи, которая препятствует проникновению флуоресцентного красителя в микробную клетку. Поэтому нецелесообразно использование ЛМ для нативной мокроты, но применять этот метод рекомендуется при исследовании мазков, приготовленных после центрифугирования из осадка материала, обработанного для культурального исследования и нейтрализованного после деконтаминации. Поэтому метод ЛМ следует применять в бактериологических лабораториях, где культуральное и микроскопическое исследование может быть произведено из одной и той же порции диагностического материала.
Другим признаком туберкулёза является присутствие в препарате так называемых эпителиоидных клеток, из которых и развиваются клетки Лангханса. Это происходит при увеличении количества ядер без разделения цитоплазмы, которая только увеличивается в размерах (рисунок 1, г).
Микроскопия позволяет быстро получить результат, но обладает низкой чувствительностью и специфичностью, невозможностью дифференциации кислотоустойчивых микобактерий.
Рисунок 1
Культуральный метод
Наиболее распространенным методом выявления микобактерий туберкулеза в нашей стране является культуральный метод. Это «золотой стандарт» бактериологической диагностики туберкулеза, так как чувствительность метода существенно выше микроскопического и дает возможность получить чистую культуру микобактерий для её последующей идентификации и исследования лекарственной устойчивости. Этот метод дает положительные результаты при наличии в исследуемом материале от 20 до 100 жизнеспособных микробных клеток в 1 мл. Однако он трудоемок и длителен в связи с тем, что микобактерии туберкулеза растут очень медленно и их обнаружение может быть зарегистрировано только через 3 недели культивирования.
Следует отметить, что в связи с высокой избирательностью различных штаммов микобактерий и потребностью в полноценных белках до сих пор нет универсальной питательной среды, способной заменить все остальные. В Приказе № 109МЗ РФ для посева диагностического материала на МБТ рекомендуется использовать по одной пробирке международной питательной среды Левенштейна-Йенсена и Финна-2. Однако практика показывает, что кроме указанных сред целесообразно использовать и какую-либо из дополнительных, а посев на три пробирки питательной среды также повышает эффективность культуральной диагностики.
Для полноценной культуральной диагностики туберкулеза необходимо иметь соответствующие помещения и оборудование. Особенно важно наличие центрифуги и антиаэрозольной защитой и способностью обеспечить ускорение 3000g. А также шкафов биологической безопасности для предотвращения внутрилабораторного инфицирования.
Системы BACTEC
Из перечисленных автоматизированных систем наиболее эффективна в настоящее время система BACTEC MGIT 960BD. Флаконы MGIT с жидкой питательной средой 7Н9 содержат в придонной части под силиконом флуоресцентный индикатор, «погашенный» высокими концентрациями кислорода. При наличии роста микобактерий в процессе поглощения кислорода индикатор начинает светиться, регистрация флуоресценции в сисиеме BACTEC MGIT производится автоматически. Использование флаконов MGIT возможно и «вручную», тогда регистрацию свечения производят с помощью трансиллюминатора на флаконах MGIT составляет 11 суток.
Так называемые дефектные по клеточной стенке L-формы микобактерий и других инфекционных патогенов являются результатом изменчивости и основным видом персистирования, то есть переживания в неблагоприятных условиях. Посев на L-формы особенно эффективен при внелегочном туберкулезе, поскольку вегетация МБТ в очагах ВЛТ при повышенном ацидозе и анаэробиозе приводит к снижению их жизнеспособности и ферментативной активности.
Диагноз не может быть поставлен только на основании выявления L-форм микобактерий, но их обнаружение, особенно при верификации методом ПЦР, является весомым аргументом в пользу туберкулезной природы заболевания. В очагах внелегочного туберкулеза наблюдается ранняя L-трансформация микобактерий, поэтому их обнаружение позволяет поставить диагноз на начальных стадиях заболевания.
Методы диагностики ЗППП
Микробиологические исследования
Бактериоскопический метод (мазок на инфекции)
При бактериоскопическом методе анализ выполняется с помощью светового микроскопа. Исследуемый материал вносят в каплю физраствора, тщательно размешивают и распределяют по стеклу. Должно наступить хорошее окрашивание частей клеток и бактерий в разные цвета, чтобы оценить состав выделений из уретры, влагалища и шейки матки.
Перед сдачей мазка лучше воздержаться от мочеиспускания.
Бактериологический метод (бакпосев)
Бакпосев – метод диагностики ЗППП путем выращивания микробов в благоприятной для этого среде. Он является золотым стандартом в определении инфекций, поскольку выявляет не только вирус, но и его активность. Преимуществом данного метода является возможность не только выявить бактерию, но и возможность получить антибиотикограмму, на основе которой врач назначает точное лечение. Наиболее часто бакпосев используют для диагностики уреаплазмоза, микопламзоза, трихомониаза, хламидиоза, различных форм кандидоза.
Правила сдачи анализа на бакпосев:
Молекулярная диагностика
Серологические и иммунохимические исследования
ПИФ предусматривает прямое выявление антигенов хламидий.
ПИФ-метод является важнейшим скриниговым методом диагностики урогенитального хламидиоза.
Показания к назначению анализа:
Подготовка к исследованию: У женщин взятие биологического материала лучше всего проводить не ранее чем через 14 дней после менструации. Перед взятием материала пациентам рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.
Материал для исследования: соскоб из уретры или цервикального канала, осадок мочи, секрет предстательной железы.
Недостатком данного метода является частота ложноположительных результатов на хламидиоз. При использовании метода прямой иммунофлюоресценции ложноположительный диагноз урогенитального хламидиоза ставится у 36% пациентов. В зарубежной практике установленный по ПИФ диагноз принято подтверждать с помощью культурального исследования.
Иммуноферментный анализ нацелен на выявление антител в крови. Соответственно, чем больше титр, тем больше антител к тому или иному инфекционному заболеванию. IgG – антитела говорят о перенесенном в прошлом инфекционном заболевании, а IgМ – антитела говорят о наличии острого инфекционного процесса. ИФА позволяет диагностировать:
Биологический материал со слизистых оболочек верхних дыхательных путей
Сбор материала для культуральных исследований и микроскопии необходимо проводить до назначения специфической противомикробной терапии. Несоблюдение данного условия может привести к ложноотрицательному результату исследования. материал берут натощак или через 3-4 ч после еды. Для более полного открытия глоточного отверстия рекомендуется по время забора материала надавливать шпателем на корень языка. Важно, чтобы при извлечении тампона он не касался зубов, щек, языка. Для сбора мазков из носоглотки и ротоглотки используются стерильные зонды, которые после сбора материала погружают в контейнеры с транспортной средой, обеспечивающей стабильность и сохранение ростовых свойств микроорганизмов. Тип зондов, состав транспортных сред, методику сбора, а также условия хранения и транспортирования клинического материала следует уточнить в инструкции к используемым реагентам.
Допускается лишь однократное замораживание–оттаивание материала.
Мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки для выявления РНК/ДНК – рекомендуется совмещать мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки в одной пробирке. Для этого сначала берут мазки разными зондами со слизистой нижнего носового хода, а затем из ротоглотки, при этом рабочие концы зондов после взятия мазков у пациента помещаются в одну пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков, и исследуются как один образец. Материал берется после полоскания полости ротоглотки кипяченой водой комнатной температуры. Если полость носа заполнена слизью, перед процедурой рекомендуется провести высмаркивание. В течение шести часов перед процедурой нельзя использовать медикаменты, орошающие носоглотку или ротоглотку и препараты для рассасывания во рту. Мазки со слизистой носоглотки берут сухим стерильным назофарингеальным велюр-тампоном на пластиковом аппликаторе. Зонд вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2–3 см до нижней раковины, слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину до носоглотки, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. Общая глубина введения зонда должна составлять примерно половину расстояния от ноздри до ушного отверстия (3–4 см для детей и 5–6 см для взрослых). После забора материала конец зонда с тампоном опускают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков до места слома, при этом гибкая часть зонда сворачивается спиралью, далее, прикрывая сверху пробирку крышкой, рукоятку зонда опускают вниз, добиваясь полного отламывания верхней части зонда. Пробирку герметично закрывают. Мазки из ротоглотки берут сухими стерильными зондами из полистирола с вискозными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки, аккуратно прижимая язык пациента шпателем. После забора материала рабочую часть зонда с тампоном помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды и зондом с мазком из носоглотки. Конец зонда с тампоном отламывают, придерживая крышкой пробирки с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть пробирку.
Смыв из ротоглотки для диагностики эпидемического паротита (выделение РНК). Перед взятием смывов из ротоглотки проводят предварительное полоскание полости рта водой. После этого проводят тщательное полоскание ротоглотки (в течение 10-15 с) 25-40 мл изотонического раствора натрия хлорида. Жидкость собирают через стерильную воронку в стерильный флакон на 50 мл.
Мазки из ротоглотки и носа для диагностики дифтерии, пневмококковой, стафилококковой, стрептококковой инфекции (культуральные исследования) – для взятия материала используется сухой стерильный ватный тампон, вмонтированный в пробку пробирки или готовые транспортные среды, отдельным тампоном из ротоглотки и из носа. Взятие мазков осуществляют натощак или не ранее двух часов после еды, не касаясь тампоном языка, внутренних поверхностей щек и зубов.
Мазки из ротоглотки и носа для диагностики менингококковой инфекции (культуральные исследования) – тампон вводят через ротовую полость ватным концом кверху за мягкое небо в носоглотку и проводят 2–3 раза по задней стенке. При извлечении из ротоглотки тампон не должен касаться окружающих тканей (зубы, слизистая щек, язык, небный язычок). После извлечения тампона содержащуюся на нем слизь засевают на чашки (сывороточный агар и сывороточный агар с линкомицином) или помещают в транспортную среду для немедленной доставки в лабораторию. Допускается применение коммерческих питательных транспортных сред разрешенных к применению в Российской Федерации в установленном порядке.
Мазки из носоглотки для диагностики гриппа (культуральные исследования) собирают стерильными зондами с вискозными тампонами из нижнего носового хода. Зонд с тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2–3 см до нижней раковины, слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход глубоко, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. Общая глубина введения зонда должна составлять примерно половину расстояния от ноздри до ушного отверстия (3–4 см для детей и 5–6 см для взрослых). После взятия материала тампон, не нарушая стерильности, помещают в пробирку с 2,0–5,0 мл вирусологической транспортной среды. Материал хранят в течение 24 ч при температуре 2–8°С, более длительно – при температуре не выше минус 16°С.
Мазки из носоглотки для диагностики коклюша (культуральные исследования) собирают стерильными зонд-тампонами с вискозным наконечником на алюминиевой основе, вмонтированный в пробку и пробирку с транспортной средой AMIES с активированным углем. Зонд извлекают из упаковки, вводят через носовые ходы и удерживают в носоглотке в течение 10 сек, чтобы он пропитался отделяемым слизистой носоглотки. После этого тампон извлекают, делая упор на боковую стенку носа, и немедленно помещают в пробирку с транспортной средой AMIES с активированным углем. Собранный материал необходимо исследовать в день получения (в исключительных случаях – хранить в холодильнике при температуре 2–8°С не более 12 ч).
Заднеглоточные мазки для диагностики коклюша (культуральные исследования) собирают стерильным зонд-тампоном с вискозным наконечником на алюминиевой основе, вмонтированным в пробку, вносят в пробирку с транспортной средой AMIES с активированным углем. Целесообразно использовать готовые комплекты. Зонд извлекают из упаковки, пробирку со средой вскрывают, конец зонда (на расстоянии 2 см от конца с тампоном) помещают в пробирку и изгибают под углом 135°, делая упор на внутренний край пробирки, и извлекают из пробирки. Аккуратно прижимая язык пациента шпателем, вводят изогнутый тампон в ротовую полость ниже язычка и собирают материал с задней стенки глотки, не задевая язык, слизистую оболочку щек и миндалины. Зонд с биоматериалом помещают в пробирку со средой AMIES, следя за тем, чтобы пробка, в которую вмонтирован тампон, плотно закрывала пробирку. Пробирки с транспортной средой AMIES до использования хранят при комнатной температуре. После взятия материала тампон, не нарушая стерильности, помещают в пробирку с 2,0–5,0 мл вирусологической транспортной среды. Собранный материал необходимо исследовать в день получения (в исключительных случаях – хранить в холодильнике при температуре 2–8°С не более 12 ч).
Метод «кашлевых пластинок» для диагностики коклюша (культуральные исследования): чашку со средой (Борде-Жангу или КУА с антибиотиками и добавлением 20% или 10% крови животных соответственно), хранящуюся при температуре 2–8°С, выдерживают при комнатной температуре, подносят на расстоянии 8–10 см ко рту кашляющего ребенка и удерживают ее в течение нескольких секунд (6–8 кашлевых толчков). Собранный материал необходимо исследовать в день получения (в исключительных случаях – хранить при температуре 2–8°С не более 12 ч).
Мазки со слизистой носоглотки для диагностики кори (культуральные и исследования, выделение РНК) – для взятия материала используют стерильный ватный тампон, которым протирают слизистую оболочку носоглотки с достаточным усилием, чтобы снять часть эпителиальных клеток. Тампоны помещают в маркированные стерильные пробирки с завинчивающимися крышками, в которых содержится 2–3 мл транспортной среды для вирусов. Если образец не может быть доставлен в вирусологическую лабораторию в течение 48 часов при температуре 4–8°С, пробирку с тампоном следует энергично встряхнуть так, чтобы смыть клетки, а затем извлечь тампон. Смывы центрифугируют при температуре 4°С при 500g (1500 об./мин) в течение 5 минут, затем осадок ресуспендируют в 2 мл питательной среды для клеточных культур.
Ресуспендированный осадок и надосадочную жидкость хранят раздельно при температуре –70°С и транспортируют в лабораторию на сухом льду в герметично закрытых флаконах, чтобы избежать попадания в них углекислоты.
Мазки из носоглотки для обнаружения антигенов внутриклеточных патогенов собирают стерильными зондами с вискозными тампонами из нижнего носового хода. Зонд с тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2–3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину глубоко (вплоть до слез у пациента), делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После взятия материала тампон помещают в пробирку с 3 мл 0,1 моль/л фосфатно-солевого буферного раствора. Для получения суспензии клеток тампон в пробирке тщательно отжимают о стенки пробирки, тампон удаляют, пробирку закрывают. Проводят центрифугирование в течение 5 мин при 3000 об/мин для осаждения клеток. Надосадочную жидкость осторожно удаляют, а осадок клеток ресуспендируют в нескольких каплях фосфатно-солевого буферного раствора и наносят на предметные стекла (не менее 3 шт.) раздельными каплями. Препарат высушивают и фиксируют 10 мин в охлажденном до 2–8°С химически чистом ацетоне. Фиксированные предметные стекла хранят при температуре 2–8°С не более 6–7 дней.