Esbl бактерии что это

Бактериемия, вызванная кишечной палочкой, продуцирующей бета-лактамазы расширенного спектра

В настоящее время отмечается распространение штаммов Escherichia coli, продуцирующих бета-лактамазы расширенного спектра (БЛРС), в частности, БЛРС типа CTX-M. Данный полирезистентный микроорганизм все чаще становится причиной тяжёлых внебольничных инфекций. Бактериемия, вызванная БЛРС-продуцирующей E.coli, представляет терапевтическую проблему, поскольку возбудитель часто оказывается резистентным к антимикробным препаратам, используемым для лечения пациентов с предполагаемым сепсисом, вызванным E.coli.

В клинической больнице на 900 коек, обслуживающей население в 550 тыс. человек, проведен анализ предрасполагающих факторов, клинических особенностей и исходов инфекций кровотока, вызванных БЛРС-продуцирующими штаммами E.coli. БЛРС изучались с помощью изоэлектрофокусировки, полимеразной цепной реакции и секвенирования.

Зарегистрировано 43 случая инфекций кровотока, вызванных БЛРС-продуцирующей E.coli, что составляет 8,8% от всех случаев бактериемии, вызванной E.coli; 70% штаммов продуцировали БЛРС типа CTX-M. Количество случаев возросло с 6 в 2001 г. до 16 в 2004 г. Очаг инфекции в большинстве случаев локализовался в мочевых (46%) или желчевыводящих путях (21%). Двадцать один случай инфекции (49%) имел нозокомиальное происхождение, 14 (32%) были связаны с оказанием медицинской помощи и 8 (19%) были внебольничными. Обструкция мочевыводящих или желчевыводящих путей отмечалась у 38% и 25% пациентов, соответственно. Анамнез недавней предшествующей антимикробной терапии имелся у 38% пациентов. Летальность составила 21%. Летальные исходы были отмечены только среди пациентов с нозокомиальными и связанными с оказанием медицинской помощи случаями инфекций.

Эмпирическая антимикробная терапия была соответствующей только у 51% пациентов. Эмпирическая терапия цефалоспоринами или фторхинолонами по сравнению с терапией комбинацией бета-лактамный антибиотик/ингибитор бета-лактамаз или карбапенемом сопровождалась более высокой летальностью (35% vs 9%; р=0,05) и чаще требовала модификации (78% vs 24%; р=0,001).

Таким образом, кишечная палочка, продуцирующая бета-лактамазы расширенного спектра, является частой причиной инфекций кровотока среди стационарных и амбулаторных пациентов в условиях распространения бета-лактамаз CTX-M. В регионах, где распространены штаммы, продуцирующие бета-лактамазы расширенного спектра, требуется пересмотреть эмпирическую терапию сепсиса, предположительно вызванного E.coli.

Rodriguez-Bano J, Navarro MD, Romero L, Muniain MA, de Cueto M, Rios MJ, Hernandez JR, Pascual A.

Bacteremia due to extended-spectrum beta-lactamase-producing Escherichia coli in the CTX-M era: a new clinical challenge.

Clin Infect Dis 2006; 43(11):1407-14.

Источник

Esbl бактерии что это

ESBL с расширенным спектром бета-лактамаз

Бета-лактамазы расширенного спектра (ESBL) представляют собой химические вещества (ферменты), которые могут продуцироваться некоторыми микробами (бактериями). ESBL могут сделать некоторые антибиотики неэффективными. Это делает инфекцию, вызванную бактериями, гораздо труднее лечить.

ESBL-продуцирующие бактерии являются лишь одним из примеров быстро растущей проблемы антибиотиков, неэффективных при лечении определенных инфекций.

Есть еще несколько антибиотиков, которые можно использовать для лечения инфекций, вызванных бактериями, вырабатывающими ESBL. Тем не менее, существующие антибиотики будут продолжать становиться менее эффективными, если не будут использоваться только тогда, когда это действительно необходимо. Также очень важно использовать антибиотики в правильной дозе для полного рекомендуемого курса лечения.

Хотя ESBL могут быть сделаны различными бактериями, они чаще всего сделаны Кишечная палочка (правильнее называть кишечная палочка). Поэтому остальная часть этой брошюры относится к Кишечная палочка Другие бактерии, которые также могут образовывать ESBL, включают виды, называемые Klebsiella.

Бета-лактамазы расширенного спектра

ESBLs

Что такое кишечная палочка?

Кишечная палочка (правильнее называть кишечная палочка) является зародышем (бактерией). Есть много штаммов (подтипов) Кишечная палочка, Многие из штаммов Кишечная палочка обычно безвредны и живут в кишечнике здоровых людей. Тем не менее, некоторые штаммы являются причиной распространенных инфекций, таких как инфекции мочи и кишечника (гастроэнтерит).

Какие инфекции и заболевания могут быть вызваны кишечной палочкой?

Следующие условия могут быть вызваны Кишечная палочка инфекции:

Инфекции мочевыводящих путей (ИМП)

Инфекция кишечника (гастроэнтерит)

Обычно это происходит из-за различных штаммов, которые обычно не живут в кишечнике. Гастроэнтерит может вызывать симптомы жидкого стула (диарея), тошноты (рвота), высокой температуры (лихорадка) и боли в животе (живот). Источником заражающих штаммов часто является зараженная пища («пищевое отравление») или другие люди, зараженные инфекцией. Диарея путешественников часто вызывается напряжением Кишечная палочка, Кишечная палочка Штаммы, вызывающие пищевое отравление и другие инфекции живота, как правило, не являются штаммами, продуцирующими ESBL, а чаще те, которые вызывают инфекции мочевыводящих путей.

Внутрибрюшные инфекции

Это инфекции, которые возникают внутри живота, часто, когда часть кишки повреждена или проколота (перфорирована). Это позволяет нормально безвредным Кишечная палочка микробы (бактерии), которые живут в кишечнике, попадают в брюшную полость и вызывают инфекцию. Например, после разрыва аппендикса или после колотой раны в живот может произойти следующее:

Другие инфекции

Другие инфекции, которые иногда вызваны штаммами Кишечная палочка включают:

Таким образом, фактически любой участок тела может быть заражен Кишечная палочка, хотя некоторые районы заражаются редко.

Другие болезни

Другие заболевания, связанные с Кишечная палочка включают гемолитический уремический синдром (ГУС) и тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру (ТТП). Это редкие, но серьезные заболевания, возникающие в результате яда (токсина), который некоторые штаммы Кишечная палочка делать. Самый важный штамм, высвобождающий токсин, называется «продуцирующий веро цитотоксин». кишечная палочка O157. Это иногда называют VTEC O157 или Кишечная палочка O157. См. Отдельную брошюру под названием E. Coli и VTEC O157 для получения более подробной информации.

Что такое ESBL-продуцирующая кишечная палочка?

Некоторые штаммы Кишечная палочка начали производить небольшие белки (ферменты), называемые бета-лактамазы расширенного спектра (ESBL). Эти ферменты важны, потому что, когда они производятся микробами (бактериями), они могут сделать бактерии устойчивыми к определенным обычно используемым антибиотикам. Это означает, что бактерии могут продолжать размножаться, вызывая более тяжелую инфекцию и становясь все труднее лечить.

См. Отдельную брошюру под названием «Антибиотики» для получения дополнительной информации об антибиотиках в целом.

Кто больше подвержен риску заражения кишечной палочкой, продуцирующей ESBL?

Большинство инфекций вызвано продукцией ESBL Кишечная палочка имели место у людей с другими заболеваниями, которые уже очень больны, а также у пожилых людей. Люди, которые принимали антибиотики по другим причинам или недавно были в больнице, также подвергаются более высокому риску.

Можно ли лечить кишечную палочку, продуцирующую ESBL?

Как можно предотвратить заражение кишечной палочкой кишечной палочкой?

Устойчивость микробов (бактерий) к антибиотикам становится очень большой проблемой. БЛРС-продуцирующих Кишечная палочка это всего лишь один пример того, как бактерии становятся устойчивыми к антибиотикам. Важно, чтобы антибиотики использовались только тогда, когда это необходимо, и, когда они необходимы, необходимо принимать полную дозу и полный курс антибиотика. Это поможет уменьшить количество бактерий, которые становятся устойчивыми к антибиотикам.

Предотвращение распространения инфекции

Многие инфекции, вызванные продукцией ESBL Кишечная палочка не распространяются от человека к человеку, такие как ИМП. Однако, если бактерии вызывают инфекцию в вашем кишечнике (гастроэнтерит), необходимо предпринять следующие шаги, чтобы предотвратить распространение инфекции другим людям:

Что это значит для меня?

Таким образом, если у вас развивается инфекция с продукцией ESBL Кишечная палочка:

Мы все можем помочь уменьшить развитие резистентных к антибиотикам микроорганизмов при правильном использовании антибиотиков. Принимайте их только тогда, когда ваш врач посоветует, что они необходимы, и в соответствии с инструкциями, которые вам даны.

Источник

Бактерии, вырабатывающие бета-лактамазу расширенного спектра (ESBL)

Эта информация рассказывает о бактериях, вырабатывающих бета-лактамазу расширенного спектра (ESBL), в том числе о путях их распространения и способах лечения вызываемых ими инфекций.

Что представляет собой бета-лактамаза расширенного спектра?

Некоторые микроорганизмы, к примеру, кишечная палочка (E. coli) и клебсиелла, вырабатывают фермент, называемый бета-лактамазой расширенного спектра (ESBL). Этот фермент делает микроорганизмы более стойкими к антибиотикам.

Микроорганизмы, вырабатывающие ESBL, могут вызывать различные заболевания, например:

В чем состоит разница между колонизацией и инфицированием микроорганизмами, вырабатывающими ESBL?

Человек может быть либо колонизирован, либо инфицирован микроорганизмами, вырабатывающими ESBL. Колонизация означает наличие микроорганизмов на коже или в организме человека при отсутствии каких-либо симптомов заболевания. Инфицирование означает наличие микроорганизмов на коже или в организме, и при этом они вызывают заболевание.

Как распространяются микроорганизмы, вырабатывающие ESBL?

Большинство инфекций, вызываемых вырабатывающими ESBL микроорганизмами, распространяется через прямой контакт с физиологическими жидкостями инфицированного человека (кровь, выделения из раны, моча, стул или флегма). Также они могут распространяться через контакт с оборудованием или поверхностями, которые могут быть заражены бактериями. Они не распространяются при простом контакте, например через прикосновение или объятие.

Кто подвержен риску инфицирования микроорганизмами, вырабатывающими ESBL?

Инфекции, вызываемые вырабатывающими ESBL бактериями, чаще возникают у людей:

Каковы симптомы инфекции, вызываемой вырабатывающими ESBL микроорганизмами?

Симптомы будут зависеть от места возникновения и типа инфекции.

Каковы методы лечения инфекции, вызываемой вырабатывающими ESBL микроорганизмами?

Инфекции, вызываемые вырабатывающими ESBL микроорганизмами, лечатся антибиотиками, к которым у них нет устойчивости. Ваш врач выберет для вас лекарство(-а) в зависимости от того, где возникла инфекция, и какой микроорганизм ее вызвал.

Какие меры по изоляции принимаются в больнице, если у меня обнаруживается инфекция, вызываемая вырабатывающими ESBL микроорганизмами?

Соблюдение таких мер может быть прекращено после того, как вы пройдете курс лечения и больше не будете являться источником инфекции для других. Ваш врач или медсестра/медбрат скажут вам, когда можно будет прекратить соблюдать эти меры.

Какие меры по изоляции мне следует принять дома, если у меня обнаружится инфекция, вызываемая вырабатывающими ESBL микроорганизмами?

Если у вас диагностировали инфекцию, вызываемую вырабатывающими ESBL микроорганизмами, соблюдайте следующие предписания:

Где я могу получить дополнительную информацию об инфекциях, вызываемых вырабатывающими ESBL микроорганизмами?

Если у вас есть вопросы, обратитесь к своему врачу или медсестре/медбрату. Кроме того, для получения дополнительной информации вы можете посетить веб-сайт:

Источник

Esbl бактерии что это

В настоящее время четко определены основные серьезные проблемы, связанные с антибиотикорезистентностью бактерий, ответственных за развитие НКИ: MRS A, MRS-КНС, VRE, штаммы грамотрицатсльных палочек, продуцирующих БЛРС (Klebsiella pneumoniae и Е. Coli), мультирезистентные и папрезистентные штаммы энтеробактерий, неферментирующих грамотрицательных палочек А. baumannii и P. aeruginosa, появление штаммов стафилококков и энтерококков, резистентных к ванкомицину и линезолиду (Guideline for Isolation Precautions: Preventing Transmission of Infectious Agents in Healthcare Settings Recommendations of the Healthcare Infection Control Practices).

Термины «мультрезистентность» (МDR, резистентность бактерии к трем классам антибиотиков и более), «экстенсивная или чрезвычайно высокая резистентность» (XDR, резистентность бактерии ко всем классам антибиотиков кроме одного или двух классов) и «панрезистентность» (PDR, резистентность бактерии ко всем классам антибиотиков) все чаще используются в литературе для описания различного уровня антим и кробной резистентности бактерий.

Ключевая роль лаборатории клинической микробиологии состоит в своевременном и точном выявлении MDR у микроорганизмов, представляющих возбудителей НКИ. Существуют различные доступные в настоящее время методы диагностики резистентности (стенотипический, молекулярный, микробиологические анализаторы MDR, составляет 19 и 33% соответственно. Назначение хиполонов и антипсевдомонадных пенициллинов служит независимым фактором риска резистентности к карбапенемам у зитеробактерий.

Инфекции, вызванные штаммами PDR-Enterobacteriaceае, связаны с высокой летальностью. Общая летальность при PDR-К. pneumoniae составляет 100% с атрибутивной летальностью 25 %. К. pneumoniae в последние годы считают наиболее «проблемным» микроорганизмом из семейства Enterobacteriaceae, у которого часто выявляется XDR или даже PDR.

По нашим данным, Е. coli, К. pneumoniae и Е. cloacae — это основные виды грамотрицательных палочек из семейства зитеробактерий, которые вызывают послеоперационные РИ у онкологических больных. Все три вида имеют свои особенности, которые необходимо учитывать при назначении антибактериальных препаратов.

При определении чувствительности грамотрицательных палочек семейства Enterobacteriaceae весьма важен поиск штаммов, способных вырабатывать ферменты, объединенные в группу бета-лактамаз расширенного действия (БЛРС). Инфекции, обусловленные микроорганизмами, продуцирующими такие ферменты, поддаются терапии ограниченным количеством антимикробных препаратов. Обоснованные рекомендации по выявлению БЛРС фенотипическими методами распространяются только на штаммы Klebsiella spp. и Е. coli. Выработка БЛРС может быть выявлена практически у всех видов этого семейства и даже у целого ряда других грамотрицательных палочек.

Продуценты бета-лактамаз расширенного действия (БЛРС) устойчивы ко всем пенициллинам, цефалоспоринам и монобактамам, даже когда in vitro эти препараты эффективны, Существуют различные методы выявления микроорганизмов, вырабатывающих бета-лактамаз расширенного действия (БЛРС), доступные практическим лабораториям. Ориентировочно можно предположить способность грамотрицательных палочек к продукции бета-лактамаз расширенного действия (БЛРС), если in vitro отмечается снижение чувствительности к таким препаратам, как цефподоксим, цефтазидим, цефтриаксон, цефотаксим или азтреонам.

Далее, при выявлении подавления действия b-лактамаз ингибиторами (например, сульбактамом, клавулановой кислотой, тазобактамом) можно утверждать, что данный штамм вырабатывает БЛРС (CLSI, M100-S18, 2003).

Следует отметить высокую чувствительность всех штаммов энтеробактерий отечественных клиниках к карбаненемам. При этом к имипенему отмечается более низкая по сравнению с меропенемом чувствительность, особенно в группе Proteus spp., где чувствительность к меропенему достоверно выше по сравнению с имипенемом (97,7% против 54,2% соответственно).

In vitro чувствительность энтеробактерий к препаратам группы аминогликозидов от 30 до 100% и весьма зависит не только от рода, по и от вида энтеробактерий, что подтверждает необходимость организации микробиологических исследований на высоком уровне, который может быть обеспечен в современных условиях.

Такие же выводы можно сделать и в отношении фторх и полонов (ципрофлоксацин, левофлоксацин). В крупных международных исследованиях отмечается высокий процент устойчивых к ципрофлоксацину штаммов E. coli, что наблюдается и в отечественных клиниках: около половины штаммов кишечной палочки устойчивы к ципрофлоксаципу. Многофакторный анализ показал, что профилактика фторхиполопами достоверно связана с увеличением устойчивости микроорганизмов к фторхинолонам и с продукцией БЛРС Е. coli.

Кроме того, монотерапия фторхинолонами в сравнении со всеми другими антимикробными препаратами статистически значимо чаще связана с развитием бактериемии на фоне антибиотикотерапии (так называемая «бактериемия прорыва» — breakthrough bacteriemia), обусловленной P. aeruginosa, Е. coli, а также MRSA.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Источник

Интересно и полезно

Полезная информация для каждого

Полимеразная цепная реакция была вновь открыта в 1983 году Кэри Маллисом. Его целью было создание метода, который бы позволил амплифицировать ДНК в ходе многократных последовательных удвоений исходной молекулы ДНК с помощью фермента ДНК-полимеразы. Через 7 лет после опубликования этой идеи, в 1993г., Маллис получил за неё Нобелевскую премию.

Полимеразную цепную реакцию используют для анализа индивидуальных вариаций последовательности нуклеотидов определенных локусов, для повышения эффективности клонирования целевых последовательностей изучаемых геномов и их прямого секвенирования, для детекции в организме патогенных микроорганизмов и т. п.

Метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. В отличие от амплификации ДНК в живых организмах, (репликации), с помощью ПЦР амплифицируются относительно короткие участки ДНК. В обычном ПЦР-процессе длина копируемых ДНК-участков составляет не более 3000 пар оснований.

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать.

Праймеры- короткие синтетические олигонуклеотиды длиной 18—30 оснований комплементарные противоположным концам разных цепей требуемого фрагмента ДНК.

Реакция проводится в 30-50 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий

Денатурация. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94—96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5—2 мин., чтобы цепи ДНК разошлись. Иногда перед первым циклом (до добавления полимеразы) проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2—5 мин. для полной денатурации матрицы и праймеров. Такой приём называется горячим стартом, он позволяет снизить количество неспецифичных продуктов реакции.

Отжиг. Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Температура отжига зависит от состава праймеров и обычно выбирается на 4—5°С ниже их температуры плавления. Время стадии— 0,5—2 мин. Неправильный выбор температуры отжига приводит либо к плохому связыванию праймеров с матрицей (при завышенной температуре), либо к связыванию в неверном месте и появлению неспецифических продуктов (при заниженной температуре).

Элонгация. ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки.Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы Taq и Pfu наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 7-10 мин.

Количество специфического продукта реакции (ограниченного праймерами) растет экспоненциально, а количество «длинных» копий ДНК линейно, поэтому в продуктах реакции доминирует специфический фрагмент ДНК. Через некоторое количество циклов рост количества продуктов замедляется за счет ограничения количества реагентов, наличия ингибиторов, появления побочных продуктов реакции.

ПЦР реального времени (real-time PCR)

Real-time PCR это группа методик, дающие возможность качественного анализа продуктов ПЦР в режиме реального времени по ходу проведения реакции. Основными этапами данного метода являются:

Кинетическая кривая PCR в координатах «Уровень репортерной флуоресценции — цикл амплификации» имеет S-образную форму. В ней можно выделить три стадии:

Полимеразная цепная реакция, известная более как «ПЦР» не сходит с заголовков статей научных журналов с тех пор, как была открыта Кэри Б. Мюллисом в 1983 году, за что он и был удостоен Нобелевской премии. Часто её описывают как метод, с помощью которого ученые могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.«Иглой» является крошечный фрагмент генетического материала, а ПЦР не только точно обнаруживает этот фрагмент, но и затем, используя естественное свойство ДНК- репликацию (размножение), делает его копии.

В течение нескольких часов с помощью ПЦР из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 100 млрд. идентичных молекул.Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в крошечных количествах. Принцип этой реакции достаточно прост и теоретически для её исполнения нужны лишь пробирка, несколько реагентов и источник тепла. Препарат ДНК, который необходимо копировать, может быть чистым, а может представлять собой очень сложную смесь биологических веществ. В качестве источника ДНК подходит и биоптат ткани пациента, и одиночный человеческий волос, и капля засохшей крови, обнаруженная на месте преступления, и мозг мумии и даже тело мамонта, пролежавшего 40 000 лет в вечной мерзлоте.

Анализ генетического материала особенно актуален для медицинской диагностики и ПЦР открывает для этого новые перспективы. ПЦР — метод молекулярной диагностики, ставший для ряда заболеваний «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически.

Что же может ПЦР? Основные медицинские области применения этого метода – диагностика инфекций и наследственных заболеваний.ПЦР открывает поистине фантастические возможности анализа генома человека – выявления дефектных генов, определяющих наследственную предрасположенность к заболеваниям.Вместе с тем, интересно и обнаружение генов, несущих информацию о полезных признаках.Например, генов снижающих риск опухолевого перерождения тканей или генов, значительно уменьшающих вероятность заражение ВИЧ-инфекцией.ПЦР используется также при генетической идентификации личности, определении степени родства.Только результат анализа ДНК позволяет окончательно дать заключение о достоверности отцовства.

Но, пожалуй, самое широкое распространение метод ПЦР в настоящее время получил как метод диагностики различных инфекционных заболеваний. ПЦР позволяет выявлять этиологию инфекции даже если в пробе, взятой на анализ содержится всего несколько молекул ДНК возбудителя. ПЦР широко используется в для ранней диагностики ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов, клещевого энцефалита, туберкулеза, заболеваний, передающихся половым путем и т.д. На сегодняшний день практически нет инфекционного агента, которого нельзя было бы выявить с помощью ПЦР.

Всем известна длительность процедуры классических методов бактериологического выделения возбудителя туберкулеза: иногда подтверждение диагноза может занимать 5 –6 месяцев.Если использовать метод ПЦР, этот срок можно сократить до нескольких часов.Высокочувствительный анализ проведенный сразу после укуса клеща позволит ответить на вопрос произошло ли заражение вирусом клещевого энцефалита или боррелиозом – методы профилактики и лечения этих клещевых инфекций совершенно различны. Это лишь самые яркие примеры преимуществ данного анализа.

Важное значение метод имеет для мониторинга и оценки эффективности терапии, особенно при вирусных заболеваниях.Определение “вирусной нагрузки”, т.е. количества вирусных частиц в крови позволяет осуществить индивидуальный подбор дозы противовирусных препаратов. При помощи ПЦР удается выявить отдельные субтипы и штаммы вирусов и бактерий, обладающих повышенной устойчивостью к тем или иным лекарственным препаратам.

Говоря о несомненном прогрессивном значении метода ПЦР, его неоспоримых преимуществах, вместе с тем, следует знать и об определенных проблемах его проведения. Чрезвычайная чувствительность метода требует строго соблюдения специального технологического режима, тщательного выполнения всех этапов анализа в отдельных изолированных зонах лаборатории. Недостаточная внимательность к процедурным тонкостям влечет неизбежную контаминацию проб и появление ложноположительных результатов.

Широкое использование недостаточно отработанных тестов при диагностики урогенитальных заболеваний, к сожалению, часто приводит к неверному результату и необоснованному назначению дорогостоящей терапии, иногда оставляющей массу побочных эффектов. Таким образом, недобросовестное проведение анализа ведет к незаслуженной дискредитации метода.

Для правильной интерпретации результатов необходимо также знать, что выявление ДНК возбудителя не всегда говорит о состоянии его жизнеспособности, а также о непосредственной связи выявленного инфекционного агента с конкретным патологическим процессом.Результат ПЦР значительно увеличивает свою информативность при комплексном обследовании пациентов с дополнительным использованием других лабораторных (иммуноферментных, биохимических и др.) и клинических исследований.

Результаты научных исследований указывают на необходимость определения чувствительности перед назначением антимикробной терапии. Знание бактериальной резистентности к антибиотикам имеет важное значение для успешной борьбы с болезнью.

Назначение несвоевременной и неадекватной терапии внутрибольничных и тяжелых инфекций увеличивает вероятность летального исхода. Поэтому очень важно на ранних стадиях заражения выявить тип антибиотикорезистентности, чтобы подобрать адекватную схему лечения и использовать наиболее эффективные антибактериальные препараты. В случае тяжелых инфекций это нужно сделать в кратчайшие сроки.

В отличие от традиционных микробиологических методов, метод ПЦР позволяет проводить идентификацию генетических детерминант резистентности микроорганизмов, в том числе сложно культивируемых бактерий, в течение 4 часов. Он отличается высокой точностью и меньшими требованиями к забору материала, не требует наличия питательных сред, дисков с антибиотиками и дополнительных реактивов. Определение антибиотикорезитентности с помощью ПЦР позволяет спрогнозировать появление устойчивости к различным группам антимикробных препаратов, а также оценить распространение резистентных штаммов на локальном и региональном уровнях. Поэтому обнаружение антибиотикорезистентности методом ПЦР является отличным дополнением к традиционному микробиологическому тестированию.

В современной клинической практике можно выделить несколько вариантов антибактериальной резистентности, приводящих к крайне серьезным социально-экономическим последствиям. К таким вариантам относятся:

Большинство из перечисленных вариантов обусловлено приобретением бактериями данной группы той или иной генетической детерминанты устойчивости (таблица 1), обнаружение которой возможно с помощью ПЦР.

В ООО НПФ «Литех» разработана серия ПЦР-наборов для обнаружения генетически обусловленной устойчивости микроорганизмов к антибиотикам.

Грамотрицательные бактерии, в том числе возбудители нозокомиальных инфекций, как правило, реализуют устойчивость к b-лактамным антибиотикам за счет продукции многочисленных β-лактамаз, при этом один штамм может продуцировать несколько различных ферментов. Продуцируемые бактериями ферменты различны по своей субстратной специфичности, среди них выделяют следующие типы:

Генотипирование на основе ПЦР остается золотым стандартом детекции и идентификации β-лактамаз, в том числе металло-β-лактамаз.

Необходимость обнаружения генов blaSHV, blaTEM, ответственных за продукцию пенициллаз, или b-лактамаз узкого спектра действия (NSBL)

Штаммы, продуцирующие β-лактамазы узкого спектра действия (NSBL), обычно вырабатывают TEM-1 и/или SHV-1 ферменты, которые разрушают пенициллины и ранние цефалоспорины, но чувствительны к другим классам β-лактамных антибиотиков. Мутации в промоторном участке гена TEM-1 могут привести к гиперпродукции этих ферментов. Подобная гиперпродукция может обернуться устойчивостью к другим b-лактамным антибиотикам, помимо пенициллина. Точечные мутации в этих ферментах могут привести к возникновению устойчивости к ингибиторам β-лактамаз, например, сульбактаму и клавулановой кислоте. Устойчивые штаммы особенно опасны при лечении инфекций у детей, когда препаратами выбора являются пенициллины и ранние цефалоспорины. При неадекватной терапии существует риск перехода заболевания в хроническую форму.

Для обнаружения генов устойчивости к пенициллинам и ранним цефалоспоринам разработаны следующие наборы:

• Резистентность к пенициллинам – 1

Резистентность Enterobacteriaceae и Pseudomonas к пенициллинам и ранним цефалоспоринам. (Гены TEM)

Резистентность Enterobacteriaceae к пенициллинам и ранним цефалоспоринам. (Ген SHV-не ESBL)

Для обнаружения устойчивости энтеробактерий к цефалоспоринам разработан набор:

Резистентность Enterobacteriaceae к цефалоспоринам. (Гены CTX-M)

Необходимость обнаружения генов, ответственных за продукцию металло-бета-лактамаз, или карбапенемаз

Карбапенемы, главным образом имипенем и меропенем, являются основными агентами в борьбе с грамотрицательными палочками, обладающими множественной лекарственной устойчивостью. В этой связи распространение грамотрицательных бактерий, продуцирующих карбапенемазы, представляет серьезную проблему в сфере здравоохранения. С 2009 года Национальная референсная лаборатория Германии отслеживает молекулярную эпидемиологию карбапенемаз грамотрицательных нозокомиальных патогенов. В 2011 среди 1454 бактериальных изолятов устойчивость к карбапенемам была обнаружена у 34,4% штаммов Enterobacteriaceae, 19,9% штаммов Pseudomonas aeruginosa и в 96,3% изолятов Acinetobacter baumannii.

Распространение NDM-1 гена, кодирующего Нью-Дели металло-b-лактамазу (NDM-1) в Enterobacteriaceae, является одной из основных проблем глобального здравоохранения. Продукт гена NDM-1 способен гидролизовать практически все b-лактамные антибиотики и в сочетании с другими механизмами резистентности делает бактерию устойчивой почти ко всем антибиотикам. Первоначально плазмиды, кодирующие blaNDM-1, были обнаружены у Klebsiella pneumoniae и Escherichia coli. Посредством конъюгации плазмиды могут передаваться и другим видам. Недавно blaNDM-1 были обнаружены в Acinetobacter baumannii и Vibrio cholerae.

NDM ферменты, такие как NDM-4, сейчас эволюционируют в более каталитически активные варианты.

Инфекции крови, вызванные OXA-48-продуцирующими Enterobacteriacea, имеют плохой прогноз, поскольку часто происходит задержка между постановкой диагноза и началом адекватной терапии.

Обнаружение способности продуцировать металло-β-лактамазы различными представителями грамотрицательных бактерий, оценка масштабов встречаемости кодируемых их генов в клинических образцах важны для предотвращения распространения инфекции и проведения адекватной этиологической терапии пациентов.

Задачу обнаружения генов, кодирующих карбапенемазы, решают следующие наборы:

Резистентность Enterobacteriaceae и Pseudomonas к карбапенемам. (Гены VIM)

Резистентность Enterobacteriaceae к карбапенемам. (Гены NDM)

Резистентность Enterobacteriaceae к карбапенемам. (Гены OXA-48)

Грамположительные бактерии, как правило, реализуют устойчивость к b-лактамным антибиотикам за счет модификации пенициллин-связывающих белков (ПСБ), являющихся их мишенями действия. В частности, стафилококки способны синтезировать ПСБ2а, обладающий сниженной аффинностью к пенициллинам (метициллину и оксациллину) и цефалоспоринам. Способность к продукции такого белка кодируется геном MecA, передающимся в популяции в составе мобильной хромосомной кассеты.

• Резистентность к цефалоспоринам- 2

Резистентность S. aureus к b-лактамным антибиотикам. (Ген MecA)

Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium являются причиной 85-90% энтерококковых и третьей по частоте причиной внутрибольничных инфекций, особенно бактериемии, сепсиса у детей, эндокардита, инфекций мочевыводящих путей. Большинство больничных изолятов энтерококков устойчивы к обычным антибиотикам, устойчивость к ванкомицину достигает 40% популяции. Два гена резистентности (VanА и VanB) являются наиболее распространенными, особенно среди E. faecium. Штаммы с VanА геном устойчивы к ванкомицину и тейкопланину, штаммы с VanB устойчивы к ванкомицину, но сохраняют чувствительность к тейкопланину.

Ванкомицин-устойчивые энтерококки (VRE) являются важными этиологическими агентами внутрибольничных инфекций. Частота обнаружения VRE особенно высока в отделениях интенсивной терапии новорожденных в связи с иммунной недостаточностью у новорожденных, частым использованием антибиотиков и длительного срока госпитализации.

По данным последних публикаций метод ПЦР является наиболее быстрым и чувствительным методом для одновременного обнаружения энтерококков и определения их резистентности к ванкомицину. Среднее время проведения ПЦР и стандартного микробиологического исследования занимает 10 часов и 5 дней, соответственно.

Для выявления устойчивости энтерококков к гликопептидным антибиотикам разработан набор:

• Резистентность к гликопептидам

Резистентность E. faecalis и E. faecium к ванкоминицу и тейкопланину. (Фенотипы VanA и VanB).

Источник